熒光試劑
熒光試劑 fluorescence reagent 一種有機試劑，能與熒光較弱或不顯熒光的物質共價或非共價結合形成熒光的配合物。如8-羥基喹啉、黃酮醇、石榴茜素R、桑色素等。在它們的分子中大多含有芳香環(huán)或雜環(huán)。主要用于無機元素的熒光測定，例如，鈹、鋁、硼、鎵、硒、鎂以及某些稀土元素。對有機化合物也能對它們所發(fā)的熒光起加強、穩(wěn)定和提高選擇性的作用。
（1）FITC
| CAS |
英文名稱簡寫 |
純度 |
包裝 |
| 3326-32-7 |
5-FITC |
95% |
100mg
|
| 250mg |
| 1g |
| 5g |
| 3326-31-6 |
6-FITC |
95% |
100mg |
| 500mg |
| 1g |
| 27072-45-3 |
5（6）-FITC |
95% |
100mg |
| 500mg |
| 1g |
純品為黃色或橙黃色結晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。有兩種異構體，其中異構體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性與蛋白質結合力等方面都更優(yōu)良。FITC分子量為389.4，最大吸收光波長為490～495nm，最大發(fā)射光波長為525～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應用最廣泛的熒光素。其主要優(yōu)點是人眼對黃綠色較為敏感，通常切片標本中的綠色熒光少于紅色。
FITC能和各種抗體蛋白結合，結合后的抗體不喪失與一定抗原結合的特異性，并在堿性溶液中具有強烈的黃綠色熒光。通過在熒光顯微鏡下觀察或流式細胞儀分析可對相應抗原進行定性、定位或定量的檢測。用于醫(yī)學，農學和畜牧等方面，可對由細菌病毒和寄生蟲等所致疾病進行快速診斷。
FITC 是在熒光素的基礎上通過化學反應增加硫氰酸基團得到的，硫氰酸基團可以和生物活性物質例如蛋白質上的伯胺基團反應形成硫脲鍵，從而實現(xiàn)對生物活性物質的熒光標記
利用熒光素對蛋白質進行標記。它的主要原理是利用FITC(異硫氰酸熒光素)上的N=C=S基團和蛋白質上游離的-NH2發(fā)生化學反應，而后在特定波長光源的激發(fā)下即可觀測到熒光信號。
（2）FAM
羧基熒光素，Carboxyfluorescein，是熒光素衍生物的一種，與FITC相比，F(xiàn)AM與氨基反應更快，產物也更穩(wěn)定，但FITC結合蛋白的量更大且進程更易于控制。FAM也適用Argon-ion Laser的488nm光譜線，Abs/Em=492/518nm（pH=9.0），具有熒光素衍生物的普遍特性，在水中穩(wěn)定。5-FAM主要應用于DNA自動測序中，標記其中的d/ddCTP，也經常用于PCR產物定量，核酸探針等。
（3）FAM SE
由FAM酸與琥珀酸亞胺反應得到，它是最普遍的用來標記肽，蛋白質及核酸的綠色熒光試劑之一，同時也可用于配制各種小熒光分子。羧基熒光素（通常稱為FAM）和其胺反應琥珀酸亞胺酸在生物交聯(lián)劑中比FITC更受青睞。FAM SE能提供更耐水解的甲酰胺。另外，F(xiàn)AM SE所要求的交聯(lián)環(huán)境沒其他試劑嚴格，并能提供更好的共軛產率，所得到的交聯(lián)結果更穩(wěn)定。FITC標簽核酸和肽比相應的FAM交聯(lián)物變性速度更快。在大多數(shù)生物應用方面FAM SE試劑均可替代FITC試劑。
（4）CFDA
CFDA酯化熒光素衍生物,具有細胞滲透性，通過胞內非特異性脂酶水解成羰基熒光素CF。與傳統(tǒng)的熒光素不同，CF帶有特殊的負電荷，能延長其在細胞內的存留時間，它在檢測細菌內部脂酶活性方面有著廣泛的應用。
（5）TAMRA
| CAS |
英文名稱簡寫 |
純度 |
包裝 |
| 91809-66-4 |
5-TAMRA |
95% |
100mg |
| 500mg |
| 91809-67-5 |
5-TAMRA |
98% |
100mg |
| 500mg |
| 98181-63-6 |
5(6)-TAMRA |
98% |
100mg |
| 500mg |
TAMRA是在用的多種不同共軛物中最受歡迎的熒光試劑之一，可標記蛋白質和寡核苷酸。TAMRA具有吸光的性質，它的光譜與幾類常用的熒光化合物重疊，TMR是明亮的橙色熒光基團。經常用于淬滅基團的標記。 5-(6）-TAMRA是由兩個不同羧基TMR單體形成的混合物 。它用來修飾氨基和羧基基團，通過EDC介導的偶聯(lián)作用。它能夠與胺反應衍生形成5（6）-TAMRA SE。TAMRA具有更強的光穩(wěn)定性、更高的熒光產量和更低的pH敏感性。
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